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Le traitement tissulaire est une procédure séquentielle vitale pour préparer des échantillons biologiques pour une étude microscopique. Cet article présente les étapes fondamentales impliquées dans ce processus. Avec un accent particulier, nous explorerons ensuite l'importance critique de la fixation, l'étape initiale qui jette les bases d'une préservation tissulaire réussie et d'une interprétation histologique précise.
Le traitement tissulaire est une étape cruciale de l'histologie qui prépare des échantillons de tissus pour un examen microscopique en convertissant des tissus frais en une forme qui peut être facilement sectionnée et tachée. L'objectif est de préserver la structure et les détails cellulaires du tissu, le rendant approprié pour un diagnostic et une recherche précis. Il y a plusieurs étapes clés dans l'ensemble du processus. Chaque étape du traitement des tissus est vitale pour préserver les détails microscopiques de l'échantillon et assurer une évaluation pathologique précise.
Fixation
C'est la première et la plus importante étape où les tissus sont préservés pour empêcher la pourriture et maintenir l'intégrité structurelle. Les fixatifs courants comme le formol arrêtent l'activité enzymatique et la croissance bactérienne, aidant à stabiliser le tissu pour un traitement ultérieur.
Déshydratation
L'eau est éliminée du tissu en utilisant des concentrations croissantes d'alcool. Étant donné que les milieux d'incorporation comme la paraffine ne sont pas solubles dans l'eau, une déshydratation complète est nécessaire pour préparer le tissu aux prochaines étapes sans distorsion.
Dédouanement
L'alcool dans les tissus est remplacé par un agent effaçant, généralement du xylène ou un substitut du xylène, qui est compatible avec l'alcool et la paraffine. La clairière rend le tissu translucide et le prépare à l'infiltration.
Infiltration
Le tissu est saturé de cire de paraffine fondue. Ce processus donne au tissu suffisamment de fermeté pour être découpé en sections ultra-minces pour une analyse microscopique sans perdre sa structure interne.
Intégration (étape de post-traitement)
Après traitement, les tissus sont incrustés dans des blocs de paraffine. Cette étape aligne et oriente correctement le tissu avant qu'il ne soit sectionné sur un microtome et monté sur des lames.
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La fixation est la première étape et joue un rôle essentiel dans la préservation de la structure du tissu et la prévention de la dégradation. Il implique l'utilisation d'agents chimiques-généralement du formol (formaldéhyde)-pour arrêter toutes les réactions biochimiques et stabiliser les structures cellulaires et tissulaires. Pourquoi la fixation est-elle si importante?
Empêche l'autolyse et la putréfaction
Les cellules contiennent des enzymes qui peuvent décomposer les tissus (autolyse) peu de temps après la mort. Si elles ne sont pas fixées rapidement, ces enzymes provoquent des pertes structurelles. La fixation arrête ces processus. Il empêche également la croissance bactérienne (putréfaction), qui protège davantage l'intégrité des tissus.
Préserve la morphologie
Une bonne fixation maintient l'apparence normale et la relation des cellules et des tissus. Il garantit que les caractéristiques diagnostiques telles que les noyaux, le cytoplasme et la matrice extracellulaire restent clairement visibles au microscope.
Permet la pénétration des réactifs
Un tissu bien fixé permet aux réactifs (comme l'alcool et la paraffine) de pénétrer efficacement au cours des étapes ultérieures. Les tissus mal fixés peuvent avoir des canaux de diffusion bloqués, conduisant à une déshydratation, un dégagement et une infiltration incomplets.
Soutient une coloration de haute qualité
De nombreuses taches histologiques, telles que l'hématoxyline et l'éosine (H & E), reposent sur une bonne fixation pour produire des taches claires, nettes et interprétables. Une mauvaise fixation peut entraîner des résultats de coloration faibles, inégaux ou faux.
Impact irréversible
Contrairement aux étapes ultérieures (par exemple, déshydratation ou éclaircie), les erreurs de fixation ne peuvent pas être corrigées. Une fois qu'un tissu est sous-fixé ou sur-fixé, sa structure peut être permanenteNtly modifié ou détruit, affectant l'ensemble du processus de diagnostic.
La fixation est l'étape fondamentale du traitement des tissus, servant à préserver les échantillons de tissus aussi près que possible d'un état réaliste. Une fois qu'un tissu est retiré du corps, il commence à se dégrader rapidement en raison de l'activité enzymatique (autolyse) et de l'invasion bactérienne (putréfaction). Pour éviter cela, le tissu doit être rapidement placé dans une solution fixatrice-généralement 10% du formol tamponné neutre. Ce produit chimique stabilise les protéines et les structures cellulaires, «bloquant» efficacement le tissu dans son état actuel pour empêcher la désintégration et maintenir la morphologie pour une évaluation microscopique.
Avant la fixation, le tissu est généralement coupé en sections plus petites et minces-généralement pas plus épaisses que 3 à 5 millimètres. Cela garantit que le fixateur peut pénétrer dans tout l'échantillon uniformément et efficacement. Le volume de fixateur utilisé est également important; il devrait être au moins 10 à 20 fois le volume du tissu. Une fois immergé, l'échantillon reste dans le fixatif pendant une période spécifiée-souvent entre 6 et 24 heures-selon le type de tissu, la taille et le niveau de conservation souhaité. La sous-fixation peut laisser les tissus vulnérables à la dégradation, tandis que la sur-fixation peut provoquer un durcissement ou un masquage des détails cellulaires.
Après la fixation, le tissu peut être rincé pour éliminer l'excès de fixateur et le préparer pour les étapes de traitement ultérieures telles que la déshydratation, le nettoyage et l'infiltration de paraffine. Une bonne fixation préserve non seulement les détails structurels, mais affecte également de manière significative la qualité des taches et la facilité de sectionnement. Étant donné que tous les processus en aval dépendent d'un tissu bien fixé, la fixation est considérée comme l'étape la plus critique de la préparation des tissus pour l'analyse histologique.
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