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Le traitement des tissus est une pierre angulaire de l'histologie, transformant des échantillons biologiques frais en échantillons stables incrustés de paraffine, prêts pour un examen microscopique. Cette séquence complexe-fixation, déshydratation, éclaircie, infiltration et intégration-permet aux chercheurs, aux pathologistes et aux cliniciens d'étudier les structures cellulaires et moléculaires, faisant progresser la recherche médicale et les diagnostics. Cependant, les faux pas à n'importe quel stade peuvent compromettre les résultats, entraînant une distorsion des tissus, une mauvaise coupe ou une perte de potentiel diagnostique. Dans ce guide complet, nous explorons les problèmes courants dans le traitement des tissus, leurs causes et des solutions pratiques pour garantir des résultats de qualité. Que vous soyez technicien de laboratoire, chercheur biomédical ou professionnel de la pathologie, la maîtrise de ces défis est essentielle pour réussir.
La précision est essentielle dans le traitement des tissus histologiques, mais des problèmes découlent fréquemment d'une erreur humaine, de techniques inappropriées ou de limitations de l'équipement. Ci-dessous, nous examinons trois défis courants-le rétrécissement des tissus, l'air retenu dans les échantillons et une mauvaise incorporation ou infiltration-décrivant leurs causes et leurs solutions pour optimiser votre flux de travail.
Le rétrécissement des tissus est un obstacle courant dans l'histologie, déformant souvent les structures cellulaires et empêchant une analyse microscopique précise. La recherche suggère que les tissus peuvent rétrécir de 20% ou plus au moment où ils sont intégrés dans la paraffine, ce qui a un impact sur la morphologie et la fiabilité du diagnostic. Ce problème apparaît lorsque les fixateurs comme le formol ne pénètrent pas complètement ou sont appliqués trop brièvement, généralement moins de 6 à 24 heures, laissant les tissus insuffisamment durcis. Une déshydratation rapide grâce à des solutions d'éthanol, telles que le saut de 70% à 100% trop rapidement, extrait l'eau de manière excessive, déformant les tissus. Une chaleur excessive lors d'une infiltration de cire, souvent supérieure à 60 ° C, durcit ou rétrécit encore les échantillons délicats, compromettant la qualité.
Optimisez la fixation: utilisez une solution de formol tamponnée au phosphate pour stabiliser le tissu en réticulant les protéines, en préservant sa structure tridimensionnelle. Comptez 6 à 24 heures pour la fixation, en fonction de la taille de l'échantillon, et étendez-le pour les tissus plus grands ou plus denses, en utilisant une agitation douce pour une pénétration uniforme afin de minimiser la distorsion.
Contrôlez la déshydratation: suivez une série graduelle d'éthanol-70%, 90% et 100%, avec des étapes de 15 à 45 minutes-pour éliminer l'eau lentement, en évitant de se déformer. Surveillez chaque étape pour éviter l'eau résiduelle, ce qui peut rendre les tissus cassants ou mous.
Gérer les températures: Gardez l'infiltration de cire à 60 ° C ou moins, et vérifiez régulièrement l'intégration des plaques chauffantes centrales et des réservoirs de cire pour éviter la surchauffe, en garantissant des sections fiables et de haute qualité pour l'analyse.
L'air retenu dans les échantillons de tissus crée des vides, perturbe l'infiltration et conduit à une section inégale, en particulier dans les tissus poreux ou denses comme le poumon ou l'os. Ce problème commence souvent lors de la fixation, où les échantillons ne sont pas complètement immergés dans le fixatif, bloquant la pénétration des réactifs et piégeant les bulles d'air. Les cycles de vide inadéquats dans les processeurs tissulaires automatisés, en particulier les modèles de transfert de fluide, ne parviennent pas à éliminer l'air, ce qui compromet la qualité. Les tissus denses ou poreux sont particulièrement sujets, car les poches d'air persistent, ce qui empêche le traitement uniforme et l'analyse en aval.
Réglage de la fixation: Plongez les tissus entièrement dans un fixateur comme le formol immédiatement après la collecte pour assurer une couverture complète. Pour les échantillons poreux comme le poumon, utilisez une chambre à vide ou une agitation douce pendant la fixation pour déloger l'air piégé, empêchant les poches de persister.
Utiliser des processeurs modernes: tirer parti des processeurs de tissus à transfert de fluide, tels que le Leica Peloris™Et HealthSky estMachine de processeur de tissu, Avec des cycles de vide et de pression pour éliminer l'air, en particulier des tissus denses. Programmez suffisamment de temps de vide adapté au type d'échantillon pour des résultats optimaux.
Coupez et maintenez: Coupez les échantillons à 4mm ou moins d'épaisseur pendant la dissection pour faciliter l'accès au fixateur et au réactif, réduisant la rétention d'air. Maintenir l'équipement et former le personnel pour repérer les problèmes liés à l'air, comme les taches inégales, pour des sections lisses et de haute qualité.
Une mauvaise incorporation ou infiltration produit des blocs mous, pâteux ou inégaux, ce qui rend la section des microtomes difficile et entrave l'analyse détaillée. Ce problème se produit lorsque la déshydratation est incomplète, laissant de l'eau résiduelle qui bloque la pénétration de la cire, ou lorsque les agents de nettoyage comme le xylène ne parviennent pas à déplacer complètement l'éthanol, compromettant l'infiltration. ImproperR L'orientation pendant l'incorporation ne permet pas d'aligner les tissus, obscurcissant les structures clés, tandis que la paraffine de mauvaise qualité ou impure n'a pas la consistance nécessaire pour les blocs fermes et sectionnables, affectant la qualité.
Assurer une déshydratation approfondie: Utilisez une série graduelle d'éthanol-70%, 90% et 100%, avec des étapes de 15 à 45 minutes-pour éliminer toute l'eau libre, vérifier l'humidité résiduelle avant le nettoyage pour éviter les tissus mous et assurer l'état de préparation.
Concentrez-vous sur la compensation: faites passer les tissus à travers plusieurs changements de xylène-20, 20 et 45 minutes-pour déplacer complètement l'éthanol, ou utilisez des protocoles sans xylène avec de l'isopropanol, ajustement des températures de cire légèrement supérieures à 60 ° C pour l'élimination complète des agents.
Orienter et utiliser la cire de qualité: orienter soigneusement les tissus dans les moisissures, en faisant référence aux descriptions des échantillons pour s'aligner sur les objectifs de recherche ou de diagnostic, car le plan de section est essentiel. Investissez dans la cire de paraffine de première qualité avec des additifs comme le styrène pour la dureté et l'élasticité, permettant de fines sections et des rubans de 2 µm.
Inspectez et formez: inspectez régulièrement les centres d'inclusion pour un contrôle constant de la qualité de la cire et de la température. Former le personnel à manipuler les tissus avec douceur et précision, en produisant des blocs stables et sectionnables pour la coloration et la microscopie.
La prévention des erreurs dans le traitement des tissus est cruciale, en particulier dans les diagnostics, où les échantillons compromis peuvent conduire à l'absence de diagnostic et à la détresse du patient. Les erreurs résultent souvent d'une mauvaise planification, d'une fixation inadéquate ou de réactifs négligés. Pour éviter cela, faites correspondre les calendriers de traitement au type et à la taille des tissus-évitez les courses courtes pour les gros échantillons gras comme les tissus mammaires ou les longs pour les petites biopsies. Fixez les échantillons dans le formol immédiatement après la collecte, en ajoutant du temps supplémentaire dans les processeurs si nécessaire. Remplacer l'éthanol, le xylène et la cire selon des directives strictes, en utilisant des outils tels queLeica Biosystems PELORISPour le contrôle de qualité. Manipulez doucement les tissus pendant l'incorporation pour éviter les fractures, en utilisant des pinces chauffées juste assez chaudes pour faire fondre la cire. Former le personnel à fond sur les techniques allant de la dissection à l'intégration pour réduire l'erreur humaine. Ces étapes protègent les échantillons, garantissant des résultats fiables pour la recherche et les diagnostics.
Le traitement des tissus de haute qualité exige des procédures solides, des matériaux de qualité et des soins méticuleux. Adapter les horaires à la taille et au type de tissu, comme une course de 6 heures pour les échantillons de 4mm, en ajustant les tissus plus grands ou plus denses. Investissez dans des processeurs modernes avec des cycles vide/pression et une circulation fluide pour des résultats uniformes et rapides. Rafraîchir régulièrement l'éthanol, les agents de compensation et la cire, en tirant parti des alertes automatisées pour la cohérence. Utilisez des options sans xylène plus sûres comme l'isopropanol pour maintenir la qualité. Vérifiez l'intégration des plaques chauffantes centrales et des réservoirs de cire pour éviter les dommages causés par la chaleur. Orienter les tissus précisément dans les moisissures pour le plan de section correct. Sélectionnez de la paraffine de qualité supérieure avec des additifs pour la dureté et l'élasticité, permettant des sections minces en forme de ruban. Le traitement des documents s'exécute, les changements de réactif et les vérifications de l'équipement pour le dépannage. Ces pratiques fournissent des échantillons intégrés à la paraffine et de haute qualité pour le sectionnement, la coloration et l'analyse.
HealthSky'sÉquipement de cytologie à base de liquideEst conçu pour améliorer la précision du diagnostic en fournissant des échantillons cellulaires propres et bien conservés. Son système de traitement avancé assure une distribution cellulaire uniforme sur diapositives, soutenant des évaluations plus précises et réduisant les risques d'anomalies manquées. Idéal pour les laboratoires cliniques, il apporte cohérence et clarté aux examens cytologiques de routine.
