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Le «traitement des tissus» fait référence à une série d'étapes nécessaires pour préparer les tissus animaux ou humains de l'étape de fixation à l'état d'infiltration suffisante avec de la cire histologique appropriée, lui permettant d'être sectionné sur un microtome.
Les directeurs de laboratoire soulignent souvent l'importance du traitement des tissus pour leur personnel. Il est essentiel de comprendre que l'utilisation d'un calendrier de traitement inapproprié ou la réalisation d'erreurs fondamentales (comme un réapprovisionnement incorrect ou un séquençage de réactifs) peut entraîner la non-sectionnable des échantillons de tissus. Cela signifie qu'ils ne fourniront aucune information visuelle utile. Cette situation est particulièrement grave dans les tissus de diagnostic humains car des échantillons entiers sont traités en un seul lot. Si le tissu est endommagé dans de tels cas, il peut ne pas y avoir de tissu de rechange disponible pour une analyse plus approfondie, ce qui conduit à une situation où le laboratoire doit expliquer au patient pourquoi un diagnostic n'a pas pu être posé. Bien que les pannes mécaniques ou électriques de laMachine de traitement automatique des tissusPeut se produire, la plupart des problèmes de traitement sont causés par des erreurs humaines. Par conséquent, il est crucial de souligner l'importance d'une éducation et d'une formation appropriées pour le personnel de traitement des tissus. La prudence doit être exercée lors de la configuration des programmes de traitement pour toute course afin d'assurer les meilleurs résultats.
1. Recueillir des échantillons frais
Les échantillons de tissus frais proviennent de diverses sources et sont sujets à des dommages lorsqu'ils sont retirés de patients ou d'animaux de laboratoire. Par conséquent, ils doivent être manipulés avec soin et fixés dès que possible après la dissection. Idéalement, la fixation devrait avoir lieu sur le site d'extraction, comme dans la salle d'opération. Si cela n'est pas réalisable, il doit être fixé immédiatement à l'arrivée au laboratoire.
2. Fixation
L'échantillon est immergé dans un fixatif liquide, tel qu'une solution de formaldéhyde comme le formol. Cet agent s'infiltre progressivement dans le tissu, induisant des changements chimiques et physiques qui durcissent et préservent le tissu tout en le protégeant lors des étapes de traitement ultérieures. Seuls quelques réactifs conviennent à la fixation car ils doivent avoir des propriétés spécifiques adaptées à cette tâche. Par exemple, les composants tissulaires doivent conserver une certaine réactivité chimique pour appliquer des techniques de coloration spécifiques plus tard. La formaline (généralement tamponnée au phosphate) est le fixateur le plus couramment utilisé pour préserver les tissus qui seront transformés en sections de paraffine. Idéalement, les échantillons doivent rester dans la solution de fixation assez longtemps pour s'infiltrer dans toutes les parties tissulaires, suivis d'une période permettant à la réaction chimique de fixation de s'équilibrer (temps de fixation). Généralement, le temps de fixation des spécimens doit être de 6 à 24 heures. La plupart des laboratoires considèrent l'étape de fixation comme la première étape du programme de traitement. Après la fixation, les spécimens peuvent nécessiter une dissection supplémentaire pour sélectionner les zones appropriées pour l'évaluation. Les spécimens transformés sont placés dans des cassettes correctement étiquetées (petits paniers perforés) pour les différencier des autres spécimens. La durée de manipulation de l'échantillon dépend de la taille et du type des spécimens les plus gros et les plus petits, du processeur spécifique utilisé, des solvants choisis, de la température du solvant et d'autres variables.
3. Déshydratation
La cire de paraffine fondue étant hydrophobe (ne se mélange pas bien avec l'eau), il est nécessaire de retirer la majeure partie de l'eau des échantillons avant l'infiltration de cire. Ce processus consiste généralement à immerger les échantillons dans une série de solutions d'éthanol (alcool) de concentration croissante, aboutissant à de l'éthanol absolu. L'éthanol peut se mélanger à l'eau dans n'importe quel rapport, remplaçant progressivement l'eau dans les échantillons par de l'alcool. L'utilisation d'une séquence de concentration qui augmente progressivement minimise la déformation excessive des tissus.
Pour les échantillons pas plus épais que 4mm, une séquence de déshydratation typique est:
70% l'éthanol 15 minutes
90% l'éthanol 15 minutes
100% l'éthanol 15 minutes
100% l'éthanol 15 minutes
100% l'éthanol 30 minutes
100% l'éthanol 45 minutes
À ce stade, toute l'eau de l'échantillon, à l'exception des quantités minimales d'eau étroitement liée (moléculaire), doit être éliminée.
4. Compensation
Malheureusement, même si le tissu a maintenant une teneur en eau minimale, nous ne pouvons toujours pas l'infiltrer avec de la cire car la cire et l'éthanol ne se mélangent pas bien. Par conséquent, un solvant intermédiaire compatible avec l'éthanol et la cire de paraffine doit être utilisé. Ce solvant remplacera l'éthanol dans le tissu, qui sera ensuite remplacé par de la cire de paraffine fondue. Cette phase du programme est appelée «compensation» et les produits chimiques utilisés sont appelés «agents de compensation». Le terme «compensation» a été choisi parce que de nombreux agents de compensation (mais pas tous), en raison de leur indice de réfraction relativement élevé, peuvent fournir un certain degré de clarté optique ou de transparence au tissu. Un autre critiqueLa fonction des agents de compensation est d'éliminer de grandes quantités de graisse du tissu, car la graisse empêcherait l'infiltration de la cire.
Le xylène est un agent effaçant couramment utilisé, nécessitant de multiples changements pour remplacer complètement l'éthanol.
Pour les spécimens pas plus épais que 4mm, une séquence de compensation typique comprend: Xylène 20 minutes, Xylène encore 20 minutes, Xylène 45 minutes.
5. Infiltration de cire
À ce stade, le tissu est infiltré avec de la cire histologique appropriée. Bien que de nombreux réactifs différents aient été évalués et utilisés au fil des ans pour accomplir cette tâche, la cire histologique à base de paraffine reste la plus largement utilisée. La cire standard reste liquide à 60 ° C et peut être introduite dans le tissu à cette température, puis refroidie à 20 ° C pour se solidifier en une texture adaptée à une section cohérente. Ces cires sont composées de paraffine purifiée et de divers additifs, y compris éventuellement des résines comme le styrène ou le polyéthylène. Il est essentiel de comprendre que ces composants ont des propriétés physiques spécifiques, permettant à la cire d'être sectionnée en fines tranches aussi étroites que 2 microns, forment des rubans lorsqu'ils sont coupés sur un microtome, et maintenez suffisamment de flexibilité pour rester à plat lorsqu'il est flotté sur un bain d'eau chaude.
Pour les échantillons pas plus épais que 4mm, une séquence d'infiltration typique est:
Cire 30 minutes
Cire 30 minutes
Cire 45 minutes
6. Incorporation ou blocage
Une fois que les spécimens ont été complètement infiltrés avec de la cire, ils doivent être moulés dans un «bloc» pour être montés sur un microtome pour le sectionnement. Ce processus implique l'utilisation d'un «centre d'incorporation», où de la cire fondue est versée dans un moule et où l'échantillon y est placé. Il est essentiel de prêter une attention particulière à la bonne orientation de l'échantillon dans le moule, car la position de l'échantillon dictera le «plan de section», ce qui est vital dans l'histologie diagnostique et de recherche. Un anneau d'enrobage est ensuite placé au-dessus du moule, plus de cire est ajoutée et l'ensemble entier est placé sur une plaque froide pour se solidifier. Une fois ce processus terminé, le bloc de tissus ainsi que son anneau d'enrobage attaché peuvent être retirés du moule, prêts pour la microtomie. Il est à noter que si le traitement des tissus est effectué correctement, le bloc de cire contenant l'échantillon de tissu est très durable et peut servir de matériel d'archives essentiel.
