Fixation en histologie: techniques et meilleures pratiques

La fixation est une pierre angulaire du traitement tissulaire, essentielle pour préparer des échantillons biologiques pour un examen microscopique en histologie. Ce processus critique préserve la structure des tissus, empêche la dégradation et permet une analyse détaillée des caractéristiques cellulaires et moléculaires, entraînant les progrès de la recherche médicale et des diagnostics. Que vous soyez technicien de laboratoire, chercheur biomédical ou pathologiste, maîtriser les techniques de fixation et les meilleures pratiques est essentiel pour obtenir des résultats de haute qualité. Dans ce guide complet, nous explorons ce qu'implique la fixation, son objectif, les types de fixateurs utilisés, ainsi que les protocoles clés et les considérations de calendrier. Lisez la suite pour percer les secrets d'une fixation réussie en histologie.

Qu'est-ce que la fixation?

La fixation marque la première étape du traitement des tissus, où un agent chimique ou physique, connu sous le nom de fixateur, est appliqué sur un échantillon biologique frais pour préserver sa structure et sa composition. Les tissus frais, prélevés sur des patients ou des animaux de laboratoire, sont sujets à l'autolyse-où les enzymes endogènes décomposent les composants cellulaires-et à la putréfaction, où les bactéries provoquent la décomposition. La fixation arrête ces processus de dégradation en stabilisant les protéines, les lipides et d'autres éléments cellulaires, maintenant un état aussi proche que possible des conditions in vivo. Cette préservation est cruciale pour les étapes ultérieures telles que la déshydratation, le nettoyage, l'infiltration et l'incorporation, qui préparent les tissus à une coupe mince et à une analyse microscopique. En arrêtant la carie et en durcissant les tissus, la fixation garantit que les chercheurs et les cliniciens peuvent étudier les détails cellulaires, diagnostiquer les maladies et faire progresser la science biomédicale avec précision et fiabilité.

But de la fixation en histologie

La fixation remplit de multiples fonctions essentielles en histologie, allant au-delà de la simple préservation pour garantir des résultats de qualité. Il stabilise la structure tridimensionnelle des tissus en réticulant les protéines, empêchant l'effondrement ou la distorsion au cours des étapes de traitement ultérieures, ce qui est vital pour observer la morphologie cellulaire au microscope. Ce processus inhibe également l'autolyse et la croissance bactérienne, protégeant les tissus de la dégradation enzymatique et microbienne qui pourrait obscurcir les caractéristiques critiques. De plus, la fixation améliore la dureté des tissus, rendant les échantillons plus faciles à manipuler et à couper en sections minces et cohérentes par microtomie. Un autre rôle clé est de conserver la réactivité chimique, permettant à des techniques de coloration spécifiques, telles que l'hématoxyline et l'éosine (H & E), de mettre en évidence des structures cellulaires ou des molécules pour analyse. Sans fixation efficace, les tissus se dégradent, sapant la fiabilité des études histologiques et des résultats diagnostiques, rendant cette étape indispensable dans les flux de travail histologiques.

Types de fixatifs utilisés

Une gamme de fixatifs est utilisée en histologie, chacun avec des propriétés distinctes adaptées à des tissus spécifiques, des objectifs de recherche ou des besoins de diagnostic. Le choix du fixatif a un impact direct sur la qualité de conservation, la compatibilité des taches et l'analyse en aval. Ci-dessous, nous explorons les types les plus courants utilisés dans le traitement des tissus.

La formaldéhyde, une solution 10% neutre de formaldéhyde tamponné, est l'étalon-or en histologie. Il pénètre efficacement dans les tissus, relie les protéines pour préserver la structure et fonctionne bien avec un large éventail de taches, ce qui le rend idéal pour les applications médicales et de recherche de routine. Sa mise en mémoire tampon au phosphate empêche les changements de pH qui pourraient nuire aux tissus, garantissant des résultats cohérents pour les sections intégrées à la paraffine. Cependant, une exposition prolongée peut durcir trop les tissus, un timing prudent est donc essentiel.

Les fixateurs alcooliques, tels que l'éthanol 70% ou la solution de Carnoy (un mélange d'éthanol, de chloroforme et d'acide acétique), sont appréciés pour la pénétration rapide et la préservation de composants spécifiques comme le glycogène. L'éthanol convient aux petits échantillons délicats, tandis que celui de Carnoy excelle dans la fixation des acides nucléiques, populaires dans les études moléculaires. Ces fixateurs déshydratent également les tissus, mais la sur-fixation peut réduire ou réduire les échantillons cassants, nécessitant une surveillance étroite.

Le glutaraldéhyde, un puissant agent de réticulation, est largement utilisé en microscopie électronique pour sa préservation supérieure de l'ultra-structure. Il fixe exceptionnellement bien les protéines et les lipides mais pénètre lentement, ce qui le rend moins courant pour l'histologie de routine, car il peut interférer avec certaines taches et nécessite un lavage plus long pour éliminer les excès. D'autres options incluent la solution de Bouin, combinant l'acide picrique, le formol et l'acide acétique, qui excelle pour les tissus mous comme les embryons ou les testicules mais peut dégrader l'ADN. Les fixatifs à base de chlorure mercurique, comme B-5, offrent des détails nucléaires nets pour les échantillons hématologiques, mais sont toxiques et moins utilisés pour des raisons de sécurité. Les méthodes physiques, telles que la lyophilisation ou la fixation de la chaleur, servent des cas spécialisés, bien que les fixateurs chimiques dominent l'histologie. Le choix du bon fixateur dépend du type de tissu, des objectifs de l'étude et de la compatibilité avec le sous-marinPas de quent.

Protocoles de fixation et considérations de calendrier

Une fixation efficace exige des protocoles bien conçus et un timing précis pour obtenir une préservation optimale sans compromettre la qualité des tissus. Les protocoles varient en fonction du type de tissu, de la taille, du choix fixatif et de l'analyse prévue, tandis que le chronométrage équilibre la pénétration et la réaction chimique. Voici les principales considérations et meilleures pratiques pour une fixation réussie:

• Fixation immédiate: Commencer la fixation immédiatement après la collecte pour éviter l'autolyse. Plongez les tissus dans un fixateur comme 10% formol tamponné neutre à un rapport volume fixatif/tissu 10:1 pour assurer une pénétration complète, essentielle pour préserver la structure dès le départ.

  
  

• Moment sur mesure: les petits échantillons, tels que les biopsies de moins de 4mm d'épaisseur, peuvent se fixer correctement en 6 à 12 heures, tandis que les échantillons plus gros, comme les organes, nécessitent 24 heures ou plus. La sous-fixation laisse les tissus mous et sujets à la dégradation, tandis que la sur-fixation au formol ou au glutaraldéhyde peut durcir, réduisant ainsi l'affinité des taches.

  
  

• Contrôle de la température: Conduisez la fixation à la température ambiante (20-25 ° C) dans la plupart des cas, car elle est efficace et sûre. Un chauffage doux, tel que 37 ° C, peut accélérer la pénétration des tissus denses, mais éviter une chaleur excessive pour éviter d'endommager ou de déformer les structures délicates.

  
  

• Intégration du processeur: automatiséÉquipement de traitement des tissusComprend souvent une étape de fixation comme première station, rationalisant les flux de travail pour les laboratoires traitant plusieurs échantillons. Utilisez-les pour maintenir la cohérence, en particulier pour l'histologie de routine avec des tissus fixés au formol.

  
  

• Préparation de l'échantillon: Coupez les tissus à une épaisseur de 4 à 5mm pour une meilleure infiltration fixative, en particulier pour les échantillons denses ou gras comme le cerveau ou le sein. Les cycles d'agitation ou de vide dans les processeurs peuvent améliorer la pénétration, réduisant le temps de fixation sans sacrifier la qualité.

  
  

• Protocoles spécialisés: Pour la microscopie électronique, utilisez du glutaraldéhyde 2.5% pendant 2 à 6 heures, suivi d'un lavage tampon pour préserver l'ultra-structure. Pour les études moléculaires, une fixation rapide avec Carnoy ou l'éthanol (1-2 heures) protège l'ADN et l'ARN, répondant aux besoins d'analyse génétique.

  
  

• Traitement post-fixation: après la fixation, disséquer les tissus si nécessaire pour sélectionner les zones à incorporer, en les plaçant dans des cassettes étiquetées pour traitement. Cela garantit un suivi et un alignement précis pour la section et l'analyse en aval.

  
  

• Sécurité et documentation: adhérez aux consignes de sécurité, en particulier avec les fixateurs toxiques comme le chlorure mercurique, pour protéger le personnel du laboratoire. Documentez les temps de fixation, le type de fixateur et les conditions pour surveiller la cohérence et résoudre les problèmes, garantissant des résultats fiables.

HealthSky'sÉquipement de cytologie à base de liquideFournit des solutions avancées et efficaces pour le dépistage du cancer du col de l'utérus et l'analyse cytologique. En utilisant un milieu liquide spécialisé, il préserve les échantillons cellulaires pour une évaluation microscopique plus claire et plus cohérente. Le système automatisé assure une préparation uniforme des échantillons et des délais d'exécution plus rapides, ce qui en fait un choix fiable pour les laboratoires de cytologie modernes axés sur la précision et la productivité.