Un guide complet du traitement des tissus en histologie

Le traitement tissulaire est une procédure fondamentale en histologie qui comble le fossé entre la collecte de tissus et le diagnostic microscopique. Que ce soit dans les laboratoires de pathologie clinique ou les institutions de recherche, un traitement tissulaire précis et efficace garantit que les échantillons biologiques conservent leur intégrité structurelle, permettant une visualisation claire au microscope. Ce guide fournit un aperçu complet du flux de travail du traitement des tissus-de la fixation à l'incorporation-soulignant l'importance de chaque étape dans la production de diapositives histologiques de haute qualité.

Dans cet article, vous apprendrez ce que le traitement des tissus implique, pourquoi il est vital pour le diagnostic médical et la recherche, et comment chaque phase du processus contribue à l'interprétation précise de l'architecture tissulaire. Que vous soyez un étudiant en médecine, un technicien de laboratoire ou un professionnel de la pathologie, comprendre les nuances du traitement des tissus améliorera votre appréciation pour son rôle dans l'histopathologie moderne.

Qu'est-ce que le traitement des tissus?

Le traitement tissulaire est une étape cruciale de l'histologie qui prépare les tissus biologiques à l'examen microscopique. Cette procédure en plusieurs étapes transforme des échantillons de tissus fraîchement collectés en fines sections tachées montées sur des lames de verre. Ces sections permettent aux pathologistes et aux chercheurs d'étudier en détail l'architecture cellulaire, la structure et la composition des tissus.

Le traitement des tissus implique généralement trois phases principales: la fixation, la déshydratation et l'intégration. Ces étapes préservent l'intégrité du tissu, éliminent l'eau et stabilisent l'échantillon dans un milieu comme la cire de paraffine. Une fois traités, les tissus peuvent être sectionnés à l'aide d'un microtome et colorés pour mettre en évidence des structures spécifiques.

Pourquoi le traitement des tissus est-il important en médecine?

Le traitement tissulaire est la base sur laquelle repose le domaine de l'histopathologie. Dans le diagnostic médical, en particulier en pathologie et en oncologie, la qualité du traitement des tissus affecte directement la précision et la fiabilité des résultats. Lorsqu'un patient subit une biopsie ou une excision chirurgicale, l'échantillon de tissu prélevé est souvent sa seule chance pour un diagnostic précis. Si ce tissu n'est pas manipulé et traité correctement, cela pourrait compromettre la capacité du pathologiste à détecter des anomalies et entraîner des diagnostics retardés, manqués ou incorrects.

L'une des contributions les plus importantes du traitement des tissus à la médecine est son rôle dans le diagnostic du cancer. Les pathologistes s'appuient sur l'examen microscopique des tissus traités et tachés pour identifier les anomalies cellulaires telles que l'atypie, la dysplasie ou la malignité. Ces évaluations ne sont pas possibles sans une préservation, un sectionnement et une coloration appropriés des tissus-qui reposent tous sur un traitement efficace. Par exemple, des tissus mal fixés ou insuffisamment infiltrés peuvent montrer une architecture déformée ou des détails nucléaires peu clairs, ce qui rend difficile ou impossible la distinction entre les changements bénins et malins.

Au-delà du diagnostic, le traitement des tissus fait également partie intégrante de la planification du traitement. Pour les cancers et autres maladies complexes, le type, le grade et l'étendue de l'implication tissulaire révélés par l'analyse histologique guident les décisions cliniques. Les chirurgiens, les oncologues et autres spécialistes dépendent de ces informations pour choisir les thérapies les plus efficaces, qu'il s'agisse de la résection chirurgicale, de la chimiothérapie, de la radiothérapie ou de l'immunothérapie. Une mauvaise préparation des tissus pourrait retarder ce processus et potentiellement affecter les résultats pour les patients.

Dans le domaine des maladies infectieuses, le traitement des tissus permet aux pathologistes d'identifier des organismes tels que des champignons, des bactéries ou des parasites dans les sections tissulaires. Des taches spéciales-appliquées sur des tissus bien traités-peuvent mettre en évidence ces agents pathogènes, aidant les cliniciens à confirmer un diagnostic et à commencer un traitement approprié.

Techniques de traitement des tissus communs

Les laboratoires d'histologie modernes utilisent une gamme de techniques de traitement adaptées au type et à l'état du tissu, ainsi qu'aux exigences de diagnostic. Deux des techniques les plus utilisées sont l'infiltration de la cire de paraffine et la combinaison de la fixation, de la déshydratation et de l'incorporation.

Infiltration de cire de paraffine

L'infiltration de la cire de paraffine est la méthode la plus couramment utilisée en histologie de routine. Il s'agit d'incorporer des tissus dans la paraffine pour fournir un support pour le tranchage mince. Le processus comprend les étapes suivantes:

Dégagement: les tissus sont traités avec un solvant comme le xylène pour éliminer l'alcool de l'étape de déshydratation.

Infiltration: La cire de paraffine fondue est introduite dans le tissu à des températures contrôlées, garantissant que la cire pénètre dans tous les composants tissulaires.

Incorporation: Une fois l'infiltration terminée, les tissus sont placés dans des moules remplis de cire fondue et laissés refroidir, formant des blocs solides adaptés au sectionnement.

L'incorporation de paraffine offre plusieurs avantages: il prPorte un excellent support pour le sectionnement, la préservation à long terme des échantillons et la compatibilité avec un large éventail de techniques de coloration.

Fixation, déshydratation et intégration

Ces trois étapes forment le noyau de la plupart des flux de travail de traitement des tissus:

Fixation: C'est la première étape et la plus cruciale. Les fixatifs courants comme le formol 10% stabilisent les tissus en réticulant les protéines, empêchant l'autolyse et la désintégration microbienne.

Déshydratation: Puisque la paraffine n'est pas miscible avec l'eau, les tissus doivent être déshydratés en utilisant des concentrations ascendantes d'éthanol ou d'autres alcools pour éliminer la teneur en eau.

Dégagement et incorporation: Après la déshydratation, les agents de nettoyage comme le xylène éliminent l'alcool, ce qui rend les tissus prêts pour l'infiltration et l'incorporation de cire.

Les milieux d'incorporation alternatifs comprennent la résine, optimale pour la microscopie électronique, et la gélatine, utilisée dans les techniques de section congelée.

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Étapes de traitement des tissus dans le laboratoire d'histologie

Le traitement tissulaire en histologie suit un flux de travail méticuleusement standardisé pour assurer la préservation de la morphologie cellulaire et des détails architecturaux. Chaque étape doit être exécutée avec précision, car même des écarts mineurs peuvent compromettre la précision du diagnostic ou l'intégrité de la recherche. Les étapes suivantes décrivent la séquence complète utilisée dans un laboratoire d'histopathologie moderne:

1. Examen brut et préparation du spécimen

Le processus commence par le chiffre d'affaires, où les échantillons de tissus fraîchement excisés sont inspectés visuellement, mesurés et coupés à une taille gérable-généralement ne dépassant pas 3-4mm d'épaisseur. Cette étape est essentielle pour assurer une fixation correcte et un traitement cohérent. L'examen brut est généralement effectué par un pathologiste ou un histotechnologue qualifié, qui identifie les domaines représentatifs de la pathologie, les marges des marques d'encre et documente les caractéristiques clés avant de placer l'échantillon dans une cassette étiquetée.

2. Fixation

La fixation arrête la dégradation enzymatique (autolyse) et la putréfaction bactérienne en stabilisant chimiquement les structures tissulaires. Le fixateur le plus largement utilisé est 10% formol tamponné neutre, qui relie les protéines et préserve l'antigénicité pour une analyse immunohistochimique ultérieure. Le temps de fixation optimal varie selon le type et la taille des tissus, mais varie généralement de 6 à 48 heures. Une fixation inadéquate peut entraîner une mauvaise conservation morphologique et une faible coloration.

3. Déshydratation

Après la fixation, l'eau dans le tissu doit être progressivement éliminée pour la préparer à l'infiltration de paraffine. Ceci est réalisé grâce à une série de solutions d'éthanol graduées, passant généralement de l'alcool 70% à l'alcool absolu. La déshydratation progressive prévient le stress osmotique, le rétrécissement des tissus et la distorsion.Machine automatisée de traitement des tissusContrôle souvent la température et le timing pour améliorer la cohérence et l'efficacité pendant cette phase.

4. Compensation

La cire de paraffine n'étant pas miscible avec l'éthanol, un solvant de transition-généralement du xylène ou un substitut du xylène-est utilisé pour remplacer l'agent déshydratant. Cette étape rend le tissu transparent et le prépare à l'infiltration de cire. Un nettoyage adéquat est essentiel; un défrichement inadéquat peut provoquer une pénétration incomplète de la cire et entraîner une coupe des artefacts.

5. Infiltration de cire de paraffine

Les tissus sont immergés dans de la cire de paraffine fondue, maintenue à une température d'environ 58-60 ° C. La cire imprègne le tissu dégagé, occupant des espaces auparavant remplis de liquide intercellulaire. Cette infiltration fournit un soutien mécanique nécessaire pour sectionner des tranches minces et uniformes. Des bains de cire multiples peuvent être utilisés pour assurer une pénétration complète, en particulier pour les tissus fibreux ou adipeux.

6. Incorporation

Dans cette étape, le tissu infiltré est orienté dans un moule rempli de cire de paraffine fondue, qui est rapidement refroidie pour former un bloc de paraffine solide. Une bonne orientation est essentielle pour exposer le plan tissulaire souhaité pendant la section. Une fois intégré, le bloc est étiqueté et coupé pour se préparer à la microtomie.

7. Sectionnement

Des sections minces, généralement de 3 à 5 micromètres d'épaisseur, sont découpées dans le bloc de paraffine à l'aide d'un microtome rotatif. Ces rubans de sections sont flottés dans un bain d'eau chaude (environ 40-45 ° C) pour détendre les rides et les plis, puis transférés sur du verreLames de microscope. La précision pendant la microtomie est vitale, car des sections mal coupées peuvent masquer les caractéristiques de diagnostic.

8. coloration

Les sections tissulaires non colorées semblent translucides et manquent de contraste. La coloration confère couleur et contraste, ce qui permet de distinguer les structures cellulaires et les composants extracellulaires par microscopie optique. La coloration de routine la plus courante est l'hématoxyline et l'éosine (H & E), où l'hématoxyline tache les noyaux bleu-violet et l'éosine tache le cytoplasme et les protéines extracellulaires en rose. Des taches spéciales supplémentaires ou une immunohistochimie peuvent être utilisées pour détecter des agents pathogènes, des protéines ou des composants tissulaires spécifiques.

9. Montage

Après coloration, les lames sont à nouveau déshydratées et éliminées à l'aide de xylène. Une lamelle est ensuite apposée à l'aide d'une résine synthétique ou d'un support de montage. Cette étape protège non seulement la section tissulaire, mais fournit également un indice de réfraction adapté à la microscopie optique, améliorant la clarté et la longévité.

10. Étiquetage, contrôle qualité et archivage

Chaque diapositive terminée est étiquetée avec précision avec l'identification du patient, le numéro de cas et les détails de l'échantillon. Un contrôle de la qualité est effectué pour évaluer la qualité de la coloration et l'intégrité des tissus avant que les diapositives ne soient libérées pour interprétation diagnostique. Les diapositives et les blocs archivés sont stockés dans des conditions réglementées pour la documentation juridique, les références de recherche et l'analyse rétrospective.

HealthSky'Équipement de cytologie à base de liquideAssure la conservation des échantillons de haute qualité en suspendant les cellules dans un milieu liquide protecteur dès le moment de la collecte. Cette méthode aide à maintenir l'intégrité cellulaire et fournit une couche uniforme pour l'évaluation, prenant en charge une meilleure visualisation au microscope et des résultats plus fiables.